CHO-GS中國倉鼠卵巢細胞（谷氨酰胺系統(tǒng)）

細胞介紹
CHO-GS細胞是用含單抗蛋白等的目的基因和谷氨酰胺合成酶(GS)基因標記的表達載體，轉染宿主細胞CHO,，再通過L-氨基亞砜蛋氨酸(methionine sulphoximine,，MSX)等化合物選擇加壓促使GS基因和目的蛋白基因擴增，篩選獲得重組細胞株,，可在不含谷氨酰胺培養(yǎng)基中生長,、增殖，可避免或減少細胞代謝過程中谷氨酰胺降解積累的氨對細胞的損傷,、抑制作用,。
 
細胞特性
1） 來源：中國倉鼠卵巢
2） 形態(tài)：上皮細胞樣
3） 含量：>1x10^6 個/mL
4） 污染：支原體、細菌,、酵母和真菌檢測為陰性
5） 規(guī)格：T75瓶或者1mL凍存管包裝
 

CHO-GS中國倉鼠卵巢細胞（谷氨酰胺系統(tǒng)）

運輸和保存

（1）使用含有優(yōu)質胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細胞,。

（2）收到細胞后，可在1000RPM,，常溫條件下,，離心5min后，于潔凈操作臺棄去上清,，加入推薦使用的培養(yǎng)基后轉移至250px培養(yǎng)皿或者T75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存,。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟,。
 
細胞用途：僅供科研使用。
                      

細胞培養(yǎng)步驟
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1） 貼壁生長：準備DMEM/F12培養(yǎng)基(推薦0005, 添加200nM L-Glutamine),，90%,；優(yōu)質胎牛血清,，10%。
懸浮生長：使用專用懸浮生長無血清培養(yǎng)基：EX-CELL CD-CHO CHO Serum-free Medium,Chemically Defined(Sigma-Aldrich,貨號：24361C)
添加物：
L-谷氨酰胺（Sigma-Aldrich,貨號：G8540-25G）
Anti-Clumping Agent(Gibco,，貨號：01-0057AE)
備注：CD-CHO CHO Serum-free Medium請按照培養(yǎng)基配制說明書配制,，L-谷氨酰胺配制濃度為200mM，工作濃度為8mM（即稀釋25倍,，如500ml CHO Serum-free Medium 中添加20ml 200mM L-谷氨酰胺,，抗結團劑使用為1%，即500ml CHO Serum-free Medium 中添加5ml 抗結團劑）
備注：加入谷氨酰胺合成酶的抑制物甲硫氨酸亞砜(methionine sulphoximine ,MSX) ,可使 GS基因及與之相連的目的基因一起擴增,達到提高目的基因表達水平的目的
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%*培養(yǎng)基,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存,。

二． 細胞處理：
1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入250px皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度,。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細胞,，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

對于懸浮細胞,，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞,，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式,，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存,。貼壁細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后,，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,，再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時,，應將細胞收集,，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細胞吸走）,，加入部分新鮮培養(yǎng)基,，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存,。